Validation of the current RT-PCR assay used to detect Leptospira DNA

Rand Hasan Khalil & Mahdi Adan Shukh Mahamud Cuse

Studenteropgave: Bachelorprojekt

Abstrakt

Hidtil anvendes adskillige detekteringsmetoder i diagnosticeringen af leptospirose. Det er ofte vanskeligt at diagnosticere leptospirose, da sygdommen har udvist forskellige kliniske symptomer, der spænder fra mild forkølelses lignende manifestationer til mere alvorlige som nyrer og multiorgan svigt og i værste fald død. Hertil kommer, at leptospirose også har vist sig at efterligne andre sygdomme, som desuden komplicerer diagnostikken. De påvisningsmetoder, der anvendes i dag, er enten baseret på serologiske metoder såsom ELISA og MAT eller genotypiske metoder, såsom PCR. Begge påvisningsmetoder er meget relevante ved diagnose af leptospirose afhængigt af sygdommens forløb. Dertil har PCR vist sig at være mest følsomme i de tidlige stadier af sygdom, mens serologiske metoder har større følsomhed i senere stadier. Dette projekt er et samarbejde med Statens Serums Institut, for at udvide det nuværende RT-PCR assay anvendt til at detektere Leptospira DNA, der er patogen hos pattedyr. Den nuværende RT-PCR assay LipL32 og 16S anvendes i dag kun til humane prøver, såsom blod, spinalvæske og urin, og ønsket er at udvide assayet til også at omfatte dyreprøver. Derfor er det nuværende RT-PCR assay blevet testet på adskillige parametre. Resultaterne opnået i dette projekt har vist, at LipL32- og 16S assay har evner til at detektere adskillige Leptospira stammer og spp. Herunder detektion af Leptospira DNA i nyrevæv fra svin og hunde. Desuden har LipL32- og 16S-assay vist sig at diskriminere mellem patogene og ikke-patogene Leptospira spp. Ikke desto mindre syntes 16S assay at være mindre specifik ved at detektere, hvad der syntes at være andre bakterier i urinprøver fra svin.

UddannelserBasis - International Naturvidenskabelig Bacheloruddannelse, (Bachelor uddannelse) Bachelor
SprogEngelsk
Udgivelsesdato18 dec. 2018
Antal sider32
VejledereHåvard Jenssen