Characterization and genetic optimization of the MSL-G-AN pancreatic alpha cell line.

Ditte Møller Jakobsen

Studenteropgave: Kandidatprojekt

Abstrakt

Diabetes er en kronisk, ikke-smitsom sygdom, forårsaget af abnormt høje mængder glucose i blodbanen. Sygdommen rammer millioner af mennesker hvert år, og de ledsagede komplikationer og medicin til at standse eller behandle sygdommen har en enorm årlig pris.
Det primære fokus i videnskaben om diabetes har traditionelt været meget β-centreret, og interaktionen mellem bugspytkirtlens β- og α-celler, α-cellernes rolle i diabetes, mulige behandlingsmetoder, der involverer a-celler, er derfor sparsomt forstået. Derfor er der et reelt behov for en pålidelig og velkarakteriseret α-cellelinje for at få et modelsystem til undersøgelse af alfa-cellers rolle i diabetes.
Denne afhandling karakteriserer derfor forskellige aspekter af 12C3AN α-cellelinien til yderligere videnskabelig forskning. 12C3AN cellelinjernes fordoblingstid, betingelser for vækst i medie, sekretionen og det samlede indhold af glucagon, GLP-1 og insulin blev undersøgt med ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) og immunohistokemi. mRNA-ekspressionen af adskillige endokrine markør mRNA'er blev også undersøgt med Q-PCR (Quantitive PCR). Et knock-down af PCSK1-genet, ved brug af CRISPR/Ca9 metoden, blev også forsøgt.
12C3AN cellelinjen har en fordoblingstid på ~ 64,5 timer i enten konditioneret medium fra IN-28 eller INS-1E. Sekretionen af glucagon, GLP-1 og insulin påvirkes ikke af glucose koncentrationen. Ikke alle 12C3AN cellerne udtrykker glucagon eller GLP-1, og 75% af populationen udtrykker ingen af de to hormoner. Cellerne udtrykker mRNA for proglucagon, nuropeptid Y (NPY), somatostatin, CART (Cocaine- og Amfetamin-Reguleret Transcript), PCSK1 og PCSK2. Knock-down af PCSK1 lykkedes ikke.
Denne afhandling viser, at 12C3AN cellelinjen ikke er egnet som en repræsentativ α-cellelinje endnu. Glukagonsekretionen fra 12C3AN-celler påvirkes ikke af glucose, og cellelinjen er stadig multihormornal, da cellelinjen stadig producerer GLP-1 udover glucagon.

UddannelserMedicinalbiologi, (Bachelor/kandidatuddannelse) Kandidat
SprogEngelsk
Udgivelsesdato1 jun. 2018
Antal sider103
VejledereLouise Torp Dalgaard

Emneord

  • Diabetes
  • alpha celler
  • MSL-G-AN